15歲時參加上海電視臺的綜藝舞蹈隊，正式自食其力自己賺取學費。 ?

　　1993年，被選中主演電影《劉海粟》，那是她的第一次觸電經歷，收獲800元片酬。

　　1994年，考入上海戲劇學院94級表演系本科。 ?

　　1996年，在電視劇《真空愛情記錄》中飾演夏文心，講述了一群大學畢業生為了工作和愛情奮斗的故事。 ?

　　1998年，畢業于上海戲劇學院，畢業后參演了第一部改編自陜西駐滬作家李春平同名小說的電影《玻璃是透明的》，馬伊琍飾演“小丫子”，同年出演的第一部古裝電影《孔乙己》至今沒有公映。

　　2000年，出演了《黑洞》飾演演三陪女，馬伊琍的表演事業得到了更好的提升，在電視劇《前世今生》中飾演美貌且氣質超凡的秦婉瑩。

　　2001年，出演電視劇《白天睡覺的女人》飾演李秀 ?，在電影《西施眼》中飾演施雨，該劇在2002年美國夏威夷國際電影節中獲評審團大將及亞洲最佳電影。 ?

　　2002年，因出演電視劇《還珠格格Ⅲ之天上人間》中夏紫薇一角而被大眾所熟知。 ?

　　2004年，出演了由黃磊指導的《天一生水》飾演一個混血姑娘明妮。

　　2005年，出演張黎導演的電視劇《錦衣衛》 ?在劇中就出演了一個這樣的傾國美人客印月。

　　2006年，參演《喬家大院》扮演的“江雪瑛”

　　2007年，出演由趙寶剛指導的青春勵志電視劇《奮斗》夏琳一角而知名度得到進一步的提升。 ?

　　2008年，因拍電視劇《為誰心動》時無悔剃光了頭，憑借影片《江北好人》，馬伊琍戰勝了李冰冰、范冰冰兩位大熱候選人，成為了長春電影節影后。 ?

　　2009年，與佟大為共同出演了電視劇《婚姻保衛戰》演出夫妻間事。 ?同年馬伊琍出演了首部反映豫商故事的電視劇《經緯天地》在CCTV-8播出，這也是她繼《喬家大院》之后首次登陸央視，馬伊琍扮演尚達志的妻子順兒，這也是馬伊琍生產復出首部電視劇作品。 ?

　　2010年，與涂松巖領銜主演的都市題材電視劇《雙城生活》反映了“雙城戀”話題，讓許多觀眾產生了不小共鳴并引發了網絡熱議，而馬伊琍在劇中飾演北京大妞郝京妮。 ?憑借該劇獲得國劇盛典2011年度最佳女演員。 ?

　　2013年，年初馬伊琍與杜淳、劉莉莉、陳思斯等眾多明星合作的電視劇《青春期撞上更年期Ⅱ》， ?此外，還客串電影《不二神探》，并且徹底顛覆以往的形象。 ?2013年，首當制片人的馬伊琍與首次當導演的丈夫文章合作的電視劇《小爸爸》。 ?

　　2015年，出演了公路犯罪片《未擇之路》。電視劇《北上廣不相信眼淚》于11月7日在北京衛視、浙江衛視播出。 ?

　　2016年1月，與陳建斌領銜主演的當代都市幽默輕喜劇《中國式關系》于在北京殺青。 ?4月，在文章執導的諜戰劇《剃刀邊緣》中飾演女主角 ?。